Click chemistry常翻译为点击化学，是诺奖获得者美国化学家Sharpless提出的一种快速合成大量化合物的新方法，是继组合化学之后又给传统有机合成化学带来的重大的革新技术。现阶段，该技术已经应用于各类库化合物建立，以及新药开发和聚合物的合成等领域。

经典的点击化学合成条件为铜（I），但是在一些特定情况下，有报道过过渡态金属催化剂铜（I）诱导病毒或者寡核苷酸降解^[1]。而且铜（I）作为催化剂幼细胞毒素，应排除生物体内的应用^[2]。从而一些研究转向了其他类型的催化剂，如各种配体（二乙烯基三胺，联啶衍生物，三吡啶衍生物以及六甲基三氨乙基胺等）和其他过渡态金属（Ru，Ni，Pd，Pt和Fe等）。但是同样没有解决使用金属催化剂这一问题。

因此，越来越多的反应归纳到点击化学反应中，从一开始的铜（I）催化叠氮化合物与炔的反应（CuAAC）发展到多种反应，包括Diels-Alder和反-Diels-Alder反应、巯基和烯烃的加成以及[3+2]环加成反应等。这些反应都没有使用金属催化剂，而且还具有点击化学反应特征。

根据Oligo引物特点，在众多无铜催化模块当中，我们选择二苯并环辛炔（DBCO）结构作为无铜催化合成子。通过制备5’-DBCO-TEG亚磷酰胺（图1）、DBCO-dT-CE亚磷酰胺（图2），可分别将DBCO基团引入到寡核苷酸5’端或者插入到任何位置。

图1：5’-DBCO-TEG

图2：DBCO-dT

此外，我们还提供另一种DBCO亚磷酰胺形式，即DBCO-丝氨醇亚磷酰胺（图3）。使用丝氨醇骨架作为非核苷间隔物允许将DBCO基团插入在具有多个序列的任何位置是十分灵活的。DBCO-磺基-NHS酯（图4）也可用于合成后的偶联反应。

图3：DBCO-Serinol

图4：DBCO-sulfo-NHS Ester

DBCO修饰寡核苷酸可以在有机溶剂（如 DMSO）或缓冲液中与叠氮化物发生[3+2]环加成反应。根据使用的叠氮化物，反应可在室温下4-17小时完成，反应效率几乎是定量的。后处理简单，如果反应体系体积较小可直接进行高压制备分离，若相对较多可直接冻干反应体系再制样分离即可。

参考文献：

[1] Gierlich J, Burley G, Gramlich P, et al. Click chemistry as a reliable method for the high-density postsynthetic functionalization of alkyne-modified DNA. [J]. Organic letters, 2006, 8(17):3639.

[2] Agard N J, Prescher J A, Bertozzi C R. A strain-promoted [3+2] azide-alkyne cycloaddition for covalent modification of biomolecules in living systems. [J]. Journal of the American Chemical Society, 2004, 126(46):15046-15047.